HPLC-DADMS技术评价中药天麻的质量研究-中科出版社-中科出版社

HPLC-DADMS技术评价中药天麻的质量研究

陈佩琪

丹东市药品检验检测中心辽宁省丹东市 118002

摘要

目的：研究HPLC-DADMS技术评价不同产地不同炮制方法中药天麻的质量。方法：制备天麻药材供试品溶液、天麻素与天麻苷元对照品溶液，设定指纹图谱分析条件、含量测定分析条件、MS分析条件。结果：大部分产地天麻药材质量具有较好的相似度，陕西略阳九重金除外。与其他炮制方法相比，药材直接冻干炮制方法普遍较好。GAS为0.98~392 μg/ml（Y=0.005X-0.019，r=0.9999），HBA为1.21~484 μg/ml（Y=0.015X+0.003，r=0.9999）。结论：HPLC-DADMS技术能够全面评价不同产地不同炮制方法中药天麻的质量。

关键词

中药天麻；质量；HPLC-DAD/MS技术

正文

天麻能够将抗炎、抗惊厥、镇痛、镇静作用发挥出来，保护大脑学习功能^[1]。本文研究了HPLC-DADMS技术评价不同产地不同炮制方法中药天麻的质量。

1. 材料与方法

1.1 仪器和试剂

Agilent LC/MSD TCT Trap液质联用仪，Agilent 1100 HPLC配有二极管阵列检测器、自动进样器、在线脱气机、柱温箱、四元泵，购买TEDIA公司生产的甲醇、乙腈，北京化工厂生产的冰醋酸作为分析纯，用Milli-Q系统纯化制备去离子水。天麻药材的4种炮制方法包括直接烘干、直接冻干、煮后冻干、煮后烘干。购买中国药品生物鉴定所的天麻素，Fluka试剂公司的羟基苯甲醇（天麻苷元）。

1.2 方法

1.2.1 天麻药材供试品溶液制备

粉碎天麻药材，过60目筛，将0.1 g粉末精密称取出来，在具塞玻璃试管中置入，将10 ml水加入，充分浸润过夜，称重，第2 d超声30 min，称重，将减失溶剂补足，静置，将上清液取出来，在35℃温度下减压蒸干，将1 ml甲醇加入其中溶解并定容，过0.45 μm微孔滤膜后即得。

1.2.2 天麻素与天麻苷元对照品溶液制备

将4 mg天麻素、4 mg天麻苷元对照品精密称取出来，分别在2 ml量瓶中放置，将甲醇加入其中溶解，定容到刻度，将2 mg/ml对照品储备液获取过来。

1.2.3 指纹图谱分析条件

色谱柱：5 μm 4.6 mm×250 mm Zorbax Eclipse XDB-C18。流动相：乙腈（A）-0.1%醋酸水（B）梯度洗脱0~15 min，A：2%~8%、50%、2%，B：98%~92%、50%、98%，分别15~35 min、35~45 min。检测波长、进样量、柱温、流速分别270 nm、15 μl、25℃、1 ml/min。理论塔板数以天麻素峰计在5000以下。

1.2.4 含量测定分析条件

色谱柱为5 μm 4.6 mm×250 mm Zorbax Eclipse XDB-C18。流动相：乙腈-0.1%醋酸水梯度洗脱，比例为4.5:95.5。检测波长、进样量、柱温、流速分别270 nm、15 μl、25℃、1 ml/min。理论塔板数以天麻素峰计在5000以下。

1.2.5 MS分析条件

ESI离子源，负离子检出模式，离子源喷雾电压、温度、雾化气压力、干燥气流速分别为3.5 kV、335℃、8.3 kPa、9 L/min。

1.3 数据处理

采用国家药典委员会编中国色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版软件处理数据，比较多个色谱图，将共有模式色谱图-对照指纹图谱获取过来，将多个色谱图特征全面反映出来。将基准设定为该对照指纹图谱，将每个色谱图和其比较的相似度计算出来^[²^]。

2. 结果

2.1 不同产地不同炮制方法天麻药材指纹图谱分析

HPLC分析18个不同产地不同炮制方法天麻药材样品，每个产地有4种炮制方法，共72个天麻药材样品，将指纹图谱获取过来，采用相似度软件处理，将相似度结果获取过来，见表2，发现大部分产地天麻药材质量具有较好的相似度，陕西略阳九重金除外。与其他炮制方法相比，药材直接冻干炮制方法普遍较好。见表1。

表2 不同产地不同炮制方法天麻药材样品相似度结果分析

序号	产地	直接烘干	直接冻干	煮后冻干	煮后烘干
1	贵州大方市	0.97	0.98	0.70	0.78
2	贵州省大方市大山	0.96	0.98	0.92	0.59
3	贵州省大方市	0.97	0.94	0.95	0.82
4	四川彭州白马	0.95	0.98	0.81	0.86
5	四川彭州剑马	0.96	0.93	0.95	0.87
6	云南昭通	0.94	0.94	0.94	0.83
7	安徽省金寨市	0.84	0.97	0.93	0.75
8	山西略阳青泥河	0.91	0.98	0.96	0.91
9	陕西省勉县金华	0.97	0.98	0.97	0.96
10	陕西勉县唐家庄	0.98	0.98	0.96	0.96
11	山西略阳何家堰	0.95	0.98	0.95	0.87
12	山西略阳西华坝	0.87	0.9	0.95	0.94
13	山西略阳九重金	0.80	0.86	0.87	0.79
14	甘肃省红干市	0.97	0.98	0.93	0.93
15	甘肃省吕干市	0.97	0.98	0.94	0.93
16	山东寿光红干	0.97	0.98	0.92	0.94
17	湖南省石门市	0.96	0.98	0.90	0.85
18	河南省西峡市	0.98	0.98	0.91	0.92

2.2 天麻药材指纹图谱中共有峰的指认

采用相似度软件处理天麻药指纹图谱后将10个共有峰获取过来，采用LC-MS技术指认分析共有峰，参考相关文献并对照品对照与质谱指认将8个共有峰鉴定了出来，见表2。

表2 天麻药材指纹谱图数据与鉴定

共有峰	tR（min）	[M-H]-	MS2碎片	可能的化合物
1	3.8	190	138	柠檬酸
2	5.7	340	248	未知化合物
3	9.6	284/344/570	122	天麻素
4	14.0	122	90	对羟基苯甲醇
5	21.2	411	300	未知化合物
6	22.4	198	144	4,4'-二羟基二苯甲烷
7	24.6	120	88	对羟基苯甲醛
8	25.5	994	825	三-[4-β-D-古铜氧基苄基]-柠檬酸盐
9	27.4	390	184	天麻苷
10	28.7	228	166	4,4'-二羟基二苯醚

2.3 标准曲线与线性范围

将5 μl、10 μl、50 μl、75 μl、100 μl、150 μl、250 μl 2种对照品储备溶液精密吸取出来，在1 ml量瓶中放置，将甲醇溶液加入并定容，将系列浓度的对照品混合溶液配制出来。分别以天麻素与天麻苷元的峰面积（Y）对浓度（X）作图，将r值、线性回归方程获取过来，即Y=aX+b。GAS为0.98~392 μg/ml（Y=0.005X-0.019，r=0.9999），HBA为1.21~484 μg/ml（Y=0.015X+0.003，r=0.9999）。

3. 讨论

有研究表明^[^3-5^]，酚类化合物是天麻的主要化学成分，其中天麻素（GAS）、天麻苷元（TBA）的化学成分分别为对羟基苯甲醇-β-D葡糖苷、对羟基苯甲醛/酸等。本研究结果表明，HPLC-DADMS技术能够全面评价不同产地不同炮制方法中药天麻的质量。

参考文献：

[1]周媛,周娜,王泽旭,等. 安徽金寨红天麻、红乌天麻高效液相色谱法指纹图谱与化学成分比较[J]. 安徽医药,2023,27(4):683-690.

[2]陈壁娜,黄益穗,骆月姫. 基于HPLC-QAMS法多成分含量测定结合化学计量学评价半夏天麻丸质量的研究[J]. 湖南中医药大学学报,2023,43(5):869-876.

[3]王广政,巩晴晴,俞年军,等. 液相色谱-串联质谱法检测药食两用杂交天麻及其亲本品种中的氨基酸、核苷类成分[J]. 食品工业科技,2023,44(3):269-278.

[4]郑妍,吴雪松. 基于HPLC-CAD技术的天舒片中8种活性成分含量测定及其稳定性研究[J]. 食品与药品,2023,25(1):58-64.

[5]王辙远,张璠璠,王隆隆,等. 基于高效液相色谱指纹图谱的天麻饮片-标准汤剂-配方颗粒对比研究[J]. 中南药学,2022,20(5):985-991.

作者简介：姓名：陈佩琪性别：男出生年月日：1981.11.07 民族：汉籍贯：辽宁省丹东市人，学历：本科，工作单位：丹东市药品检验检测中心，科室：检验二室，职称：副主任中药师，研究方向具体：药品质量研究；药品质量标准研究；中药研究

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